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    高脂飼料誘導大鼠構建NAFLD模型

    非酒精性脂肪肝(NAFLD)包含了一系列的疾病發展階段,從一般脂肪變性進展到脂肪變性與炎癥并發的非酒精性脂肪肝炎(NASH),隨后進展為肝纖維化、肝硬化和肝癌。大多數肥胖的成年人有脂肪肝型態,他們的患病率達到30%以上,因此,NAFLD的患病率會隨著肥胖率的升高而升高。

    為研究NAFLD的發病機制并找出治療方法,建立動物模型是至關重要的一步??蒲腥藛T大多利用高脂飼料誘導大鼠建立NAFLD模型,但近幾年建立的NAFLD動物模型所采用的高脂飼料配方、建模周期均不一致,在研究方面具有不同的參考價值。本文對多種高脂飼料誘導大鼠建立NAFLD模型的方法進行總結,如有疑問,歡迎與我們的技術團隊討論。

    飼養環境

    環境是飼養實驗動物的必要條件之一,對于實驗動物的成活率有著很大的影響,在相關論文中對溫度和濕度幾乎都有詳細敘述,并強調了它的重要性??紤]到NAFLD模型對環境并無特殊要求,所以科研人員一般采取了22±2℃,濕度50%-60%,12小時循環照明的普通飼養環境。

    不過值得注意的是,大鼠對于環境的變化很敏感,因此要保證飼養環境各項指標的穩定。同時由于高脂飼料的緣故,大鼠的排泄物異味更重,需要及時更換墊料,飼料和飲水也需要滅菌處理,以免對實驗造成不必要的影響。

    實驗大鼠的選擇

    作為實驗的受體,大鼠的選擇十分重要,這不僅關系到實驗成本,也決定了建模的質量及周期。

    清潔級別

    對于大鼠的清潔級別選擇,綜合多篇參考文獻,即便使用普通動物,對實驗結果也沒有明顯影響,但考慮到降低大鼠死亡率和實驗成本,清潔級別越高的大鼠無疑是越好的。

    種類選擇

    對于實驗大鼠的選擇主要有Wistar大鼠和SD大鼠。其中SD大鼠相對發育更快,適應能力更強,更利于建模;缺點是價格較高,性格更兇猛。綜合考慮,我們認為SD大鼠仍然是更好的選擇,但如果預算較少也可以選擇前者。

    性別選擇

    在查閱參考的十多篇文獻中,科研人員無一例外的選擇了雄性大鼠。由于成年的雌性動物代謝存在著明顯的周期性,這可能會對實驗造成影響,所以在大部分實驗中,科研人員更傾向于選擇雄性大鼠進行實驗。

    體重選擇

    成年大鼠的體重可達300g,考慮到實驗時間一般為8-12周,我們認為選取5-6周,即120g-200g的大鼠比較合適。值得注意的是,大鼠之間的體重差異必須小于10%,以免引入無關的變量,對實驗結果造成干擾。

    高脂飼料配方

    高脂飼料的配方無疑是NAFLD建模最關鍵的因素之一,合適的高脂飼料可以實現低死亡率低,快速建立模型的目標。以下我們將對于高脂飼料的配方進行詳細探討。

    豬油含量

    豬油含量是高脂飼料的核心,更高的豬油含量可以快速建立NAFLD模型,但會影響大鼠食欲及死亡率;豬油含量過低則會造成建模周期長,癥狀不明顯。在《高脂血癥非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》中,科研人員雖然采用了42%豬油含量的高脂飼料在第8周建模成功,但個人認為并不可取,因為如此高的豬油含量會大幅度提高大鼠死亡率。我們建議使用10%豬油含量的高脂飼料,可以在12-16周得到癥狀較明顯的NAFLD模型,而且在環境適宜的情況下,通常不會有大鼠死亡。如果要縮短建模周期,可以適當提高豬油含量,但需要加入其它物質來促進吸收。

    其它物質

    由于高脂飼料在適口性方面不如常規飼料,會導致大鼠采食量下降,在一些實驗中甚至出現了實驗組大鼠體重低于對照組的情況。所以很多研究人員在高脂飼料中添加了膽鹽(1%),以提高大鼠食欲,促進消化吸收。同時也可以在飼料中添加膽固醇(1%-5%),以促進脂肪肝的形成,縮短建模周期。

    建模周期

    建模周期和許多因素相關,不能一概而論。例如高脂飼料中的豬油含量對建模周期的影響就非常大。以下我們將討論使用10%豬油含量飼料前提下所需的建模周期。

    在《高脂飲食誘導肥胖與肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》中,研究人員在8周停止建模,解剖大鼠,表明建模成功,但癥狀較輕,大部分大鼠處于輕度和中度肝炎。而上文提到的研究中,建模時間長達16周,但癥狀明顯,大部分大鼠處于中度和重度肝炎。綜上所述,可以證明12-16周是比較合適的建模周期,具體時間可結合需要選擇。

    木棒磨牙

    在《非酒精性脂肪肝動物模型的建立與思考》中,科研人員考慮到高脂飼料質地偏軟,所以為實驗組大鼠提供了木棒磨牙,結果確實提高了大鼠存活率,體重也是實驗組高于對照組的理想狀況。

    剔除肥胖基因抵抗大鼠

    《高脂飲食誘導肥胖與肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》一文中探討了肥胖抵抗基因大鼠對于建立NAFLD模型的影響。實驗結果表明,在同樣的飼養條件下,肥胖抵抗基因大鼠的癥狀確實輕于普通大鼠,這不利于NAFLD模型的建立,所以在實驗前應當將其剔除。

    總結

    高脂飼料誘導大鼠建立NAFLD模型,應選擇120-200g的雄性SD大鼠,剔除肥胖抵抗基因大鼠;環境溫度應控制在22℃左右,濕度50%-60%;喂養10%豬油含量的高脂飼料,可添加膽鹽和膽固醇,在12-16周基本可以建模成功。

    本文參考資料來源:

    1.《高脂血癥非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》劉慶豐/李中東/施孝金著;

    2.《高脂飲食誘導肥胖與肥胖抵抗型非酒精性脂肪肝大鼠模型的建立》王瑩/王鴻/蔡東聯著;

    3.《大鼠非酒精性脂肪肝模型構建的方法探討》楊曉紅/徐富翠/余鴻著;

    4.《非酒精性脂肪肝動物模型的建立與思考》王敏/閆曙光著

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